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N-당 분석 서비스

당화는 당을 단백질, 지질 또는 기타 유기 분자에 연결하는 효소반응 과정으로, 가장 일반적인 단백질 번역 후 변형(PTM)입니다. 연결된 당의 복잡성과 이성질체 특성으로 인해 당화 분석은 매우 도전적입니다. 단클론 항체, 당단백질, 호르몬, 사이토카인 및 응고 인자와 같은 단백질 치료제가 임상 실무에 점점 더 많이 사용됨에 따라 단백질 N-당화(N-글리칸, N-당)의 검출에 대한 관심이 증가하고 있습니다.

생물체에 따라 생성되는 다양한 유형의 N-글리칸

N-당(N-Glycan)은 Man3-GlcNAc2를 포함하는 올리고당 구조로, 단백질의 폴리펩타이드 사슬에 있는 아스파라긴의 NH2 그룹과 말단 N-아세틸글루코사민(GlcNAc) 사이에 글리코사이드 결합을 통해 연결됩니다. 대부분의 당 분석 샘플 준비 단계는 당단백질의 소화, 탈당화, 정제, 라벨링/유도 및 SPE를 포함합니다. 샘플의 특성에 따라 다른 절차와 기술을 사용할 수도 있습니다.

항체를 예로 든 N-당 사슬 분석의 일반적인 과정

MALDI TOF MS 및/또는 UHPLC 기술을 사용하여 당과 그 종류를 분석할 수 있습니다.

MALDI-TOF MS 기술 기반의 N-글리칸 분석

MALDI-TOF는 당화 화합물의 구조 특성화를 높은 민감도로 수행하며, 고속 처리가 가능합니다. 혼합물의 N-당을 분석할 때 MALDI는 전기분무 이온화 대신 단일 전하 이온의 형성을 통해 샘플을 분석합니다. N-글리코시다제 A 또는 F 효소 반응을 사용하여 샘플의 N-당을 방출한 후, 샘플을 메틸화하여 검출합니다.

질량 분석 기반의 N-당 사슬 분석

HILIC-UHPLC MS 기술 기반의 N-글리칸 프로파일링(N-Glycan profiling) 분석

LC-MS 기반의 N-당 분석은 현재 주류 분석 방법으로, 수소상호작용크로마토그래피(HILIC)는 N-당 분석에 사용될 수 있습니다. PNGase F 효소 반응으로 방출된 N-당은 2-아미노벤조아마이드(2-AB)를 사용하여 유도화된 후 측정되며, 대량 샘플의 N-당 분석에 사용될 수 있습니다. 형광 라벨링 전에 유도화 반응을 방해할 수 있는 세제, 비휘발성 염 또는 자유 아미노기를 포함한 물질이 많이 있는 경우, TSK Amide-80 컬럼을 사용하여 N-당을 정제할 수 있습니다. 라벨링된 N-당은 HILIC-UHPLC MS로 분석됩니다.

HILIC 컬럼을 사용한 N-글리칸 분석의 일반적인 절차

BioTage는 당학 분석 서비스 분야에서 다년간의 경험을 가지고 있으며, 귀하의 특정 요구에 맞춘 당학 분석 서비스를 제공합니다. 상담을 환영합니다!

중/영문 프로젝트 보고서

기술 보고서에서 BioTage는 귀하에게 상세한 중영문 이중언어 기술 보고서를 제공할 것입니다. 보고서에는 다음이 포함됩니다:

1. 실험 절차 (중영문)
2. 관련 질량 분석 매개변수 (중영문)
3. 질량 분석 이미지
4. 원시 데이터
5. N-당 분석 결과

N-당 분석 원스톱 서비스

주문-샘플 발송만 하시면 됩니다
BioTage 원스톱 서비스 완료: 샘플 처리-기기 분석-데이터 분석-프로젝트 보고서

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MALDI-TOF MS 기술 기반의 N-글리칸 분석

HILIC-UHPLC MS 기술 기반의 N-글리칸 프로파일링(N-Glycan profiling) 분석

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