N단서열 분석
Edman 분해법(엣드만 분해법)은 펠 에드만(Pehr Edman)이 처음 개발한 펩타이드 또는 단백질의 N-말단 아미노산 서열 분석 방법입니다. Edman 분해법의 원리는 매우 간단합니다. 알칼리 조건에서 페닐이소티오시아네이트(Phenylisothiocyanate, PITC)와 분석 대상 단백질(폴리펩타이드)의 N-말단 아미노와 반응하여 페닐티오카바미딜(PTC) 유도체를 형성한 후, 이를 처리하여 고리화하고 선택적으로 펩타이드의 N-말단을 절단하여 N-말단 아미노산 잔기의 싸이아졸리논 페닐아민 유도체를 얻습니다. 유기 용매를 사용하여 유도체를 추출한 다음, 산 조건에서 불안정한 유도체가 안정한 페닐티오히단토인(PTH) 유도체로 변환되며, 남은 펩타이드의 아마이드 결합은 영향을 받지 않습니다. HPLC 또는 전기영동법을 사용하여 생성된 페닐티오히단토인 아미노산(PTH-아미노산)을 분석함으로써 아미노산의 종류를 식별할 수 있습니다. 아미노산 식별 반응을 반복함으로써 N-말단에서 C-말단 방향으로 아미노산 서열을 순차적으로 분석할 수 있습니다. 서열이 긴 단백질(폴리펩타이드)의 경우, 샘플을 작은 펩타이드 조각으로 먼저 절단하여 펩타이드 서열을 분석한 다음, 펩타이드 정보를 결합하여 완전한 단백질 서열 정보를 얻을 수 있습니다.
단백질 N-말단 시퀀싱 프로세스
Edman 분해법의 N-말단 시퀀싱 장점:
1. PITC는 모든 아미노산 잔기와 높은 반응 수율과 회수율을 가지므로, 부산물이 적고 크로마토그래피를 통해 정확하게 식별할 수 있습니다.
2. 반응 시간이 빨라 대부분의 아미노산 잔기에 대해 30분 결합 시간과 5분 절단 반응 시간만 필요합니다.
3. 반응 후 펩타이드 사슬은 여전히 완전하며, Edman 분해법을 사용하여 새로 형성된 N-말단 아미노산을 반복적으로 측정할 수 있습니다.
Edman 분해법의 N-말단 시퀀싱 주의 사항:
1. 샘플 순도는 >90% 이상이어야 하며, 염 이온 함량은 50 mmol/L 이내, SDS 등의 변성제가 없어야 하며, N-말단은 균일한 고순도 샘플이어야 합니다.
2. 10 Pmol 샘플로 20개의 아미노산을 측정할 수 있습니다.
3. 액체 샘플은 프로테아제를 포함하지 않아야 하며, 조기에 테스트하는 것이 좋습니다. 시간이 지나면 쉽게 분해됩니다.
4. 전이 샘플은 전이 전에 너무 오래 두지 말고, 전이 후 3-6개월 간 밀봉 보관할 수 있습니다. Coomassie R-250을 사용하여 염색하는 것이 좋으며, 전기영동 버퍼로는 CAPS 버퍼를 사용하는 것이 좋습니다.
5. 샘플에 신호 피크가 없을 경우, 단백질의 N-말단 봉쇄를 권장합니다.
6. 전체 반응 과정에서 고순도의 버퍼를 사용하는 것이 좋습니다.
사례 분석:
백태파크 바이오테크는 시마즈의 PPSQ 시리즈 기기를 사용하여 단백질 또는 폴리펩타이드 샘플의 N-말단 아미노산 서열을 분석합니다. N-말단에서 30개 이상의 아미노산을 분석할 수 있습니다. 아래는 특정 단백질 약물을 분석한 실제 크로마토그래프 결과입니다. 이 프로젝트에서는 샘플 내 단백질 약물의 첫 15개의 아미노산을 분석했습니다. 아래 그림(15번째 아미노산의 크로마토그램)에서 볼 수 있듯이, 크로마토그램 피크 값은 여전히 매우 높아 매우 정확한 결과를 얻을 수 있습니다.
중/영문 프로젝트 보고서
기술 보고서에서 백태파크는 여러분에게 자세한 중영문 이중 언어 기술 보고서를 제공하며, 보고서에는 다음의 내용이 포함됩니다:
1. 실험 단계(중영문)
2. 관련 질량 분석 매개 변수(중영문)
3. 질량 분석 이미지
4. 원시 데이터
5. 생물 의약품 N-말단 서열 정보
생물 의약품 N-말단 서열 측정 원스톱 서비스
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