완전한 당화 분석
단백질 당화는 당전달효소의 작용 하에 당화합물이 단백질의 아미노산 잔기와 글리코시드 결합을 형성하여 당화합물을 단백질에 연결하는 과정입니다. 이 과정은 소포체에서 시작하여 일련의 수정을 거쳐 최종적으로 골지체에서 완료됩니다. 당화가 된 단백질은 당단백질이라고 불립니다.
당화는 생물제제의 효능, 안정성 및 면역원성에 중요한 영향을 미칩니다. 올리고당 프로파일과 당사슬 구조는 생물제제 특성을 평가하는 중요한 지표입니다. 올리고당은 단백질 접힘, 신호 전달 등 세포 과정에 참여하며, 단백질과 결합하여 당단백질을 형성합니다. 당단백질은 일반적으로 세포 표면에 위치하며, 박테리아, 바이러스의 인식 및 렉틴 등의 단백질 상호작용에 참여하여 생물제제의 정상 기능에 필수적입니다.
올리고당의 비템플릿 합성과 나뭇가지 구조로 인해 구조 해석이 어려워졌습니다. 이 문제를 해결하기 위해, 바이타이파이크 생명공학 BTP는 일련의 안정적이고 효율적인 액체 크로마토그래피 고해상도 질량 분석(LC-MS/MS) 특성화 방법을 개발했습니다. 이 방법들은 당사슬 분석에서부터 당화 부위 확인, 당펩타이드 해석에 이르는 완전한 분석 과정을 포함하여, 올리고당의 구조를 정확하게 분석하고 당화 연구에 강력한 도구와 기술 지원을 제공합니다. 다음은 기본 프로세스 다이어그램입니다.
그림 1당화 분석 절차도
생물제제 완전 당화 분석
당화 펩타이드는 당사슬이 펩타이드에 연결된 형태로, 펩타이드의 아미노산 정보, 완전한 당사슬 정보 및 당사슬과 펩타이드 결합 부위의 정보를 포함합니다. 특정 당단백질의 완전한 의미에서의 당화 분석을 실현하기 위해, 바이타이파이크 생명공학 BTP는 액체 질량 분석의 고해상도 질량 분석 플랫폼을 기반으로 해당 분석 방법을 개발했습니다. 이 방법들을 통해 우리는 다음과 같은 정보를 얻을 수 있습니다.
• 당화 부위의 위치 지정, 즉 단백질 내의 어떤 부위가 당화 수정을 받았는지 확인합니다.
• N-당화 부위와 O-당화 부위를 구분하여 당사슬 수정의 유형을 결정합니다.
• 각 N-당화 부위에 해당하는 당사슬의 구성, 구조 및 상대 함량 정보를 얻습니다.
• 각 O-당화 부위에 해당하는 당사슬의 구성과 상대 함량 정보를 얻습니다.
• 위의 정보를 통계하고 요약하여 당단백질의 당화 특성을 더욱 분석하고 해석할 수 있도록 합니다.
이 분석 결과는 당단백질의 당화 수정 상태를 깊이 이해하는 데 도움이 되며, 당단백질의 기능과 생물학적 의미를 연구하는 데 중요한 정보를 제공합니다.
실험 기기
• NanoLC: Vanquish NEO
• MS: Orbitrap Fusion Lumos With ETD
실험 결과 전시
1.당화 수정 유형
표 1 당화 수정 유형 통계
참고: Type: 당화 수정 유형; Position: 당화 부위의 단백질 내 위치; Glycans NHFAGNa: 당화 수정의 당형; Modification Type(s): 당형의 분자량; Score: 단백질 점수; Intensity: 단백질의 상대적 풍부성; Percentage %: 해당 당형이 각자 대응하는 부위의 총 당형에서 차지하는 비율.
2.당화 부위 수정 효율
그림 2 당화 효율 통계 그래프
참고: 당화 효율(%)= * 100
3.각 당화 부위의 다양한 당형 비율
그림 3 당형 비율
참고: 그림은 특정 부위에 포함된 N-당형과 그 비율을 나타냅니다. 가로축은 당형, 세로축은 당형의 비율입니다.
4.단백질 당화 수정 정보 요약도
그림 4 당화 정보 요약
참고: 그림은 각 부위에 있는 함량 상위 3개의 당을 나타냅니다.
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