단백질 샘플 식별 과정에서는 일반적으로 Trypsin만을 사용하여 단백질을 효소 절단하며, 식별된 펩타이드 커버리지는 약 60%입니다. 표적 단백질의 전체 서열 정보를 얻기 위해, 바이오타이 팩에서는 단백질 식별 과정에서 일반적으로 사용되는 6가지 효소(Trypsin, Chymotrypsin, Asp-N, Glu-C, Lys-C, Lys-N)를 각각 사용하여 표적 단백질을 효소 절단 및 식별합니다. 더 많은 분해 펩타이드 조각을 얻는 동시에, 펩타이드 간의 연결을 통해 단백질 서열 100%의 측정을 완료합니다. 바이오타이 팩은 기존의 질량 분석 기술 플랫폼을 사용하여 LC-MS/MS 기반의 펩타이드 지도 분석을 제공합니다. 이 분석은 재조합 단백질이 완전히 표현되었는지 확인하고, 재조합 단백질 표현 과정에서 단절이 발생했는지 검출하는 데 사용할 수 있습니다. 주로 단백질 일차 구조 확인에 사용되며, 여러 효소 절단 반응과 액체 질량 연계 기술을 사용하여 펩타이드 서열을 분석하고, 전용 분석 소프트웨어를 결합하여 비특이적 효소 분해 산물의 질량 분석 데이터를 분석할 수 있습니다. 이를 통해 측정된 표적 단백질 서열의 100% 커버리지를 달성합니다.
질량 분석법 펩타이드 커버리지/펩타이드 지도 전체 서열 측정 절차:
• 먼저 6가지 효소(Trypsin, Chymotrypsin, Asp-N, Glu-C, Lys-C, Lys-N)를 각각 사용하여 표적 단백질을 효소 절단 및 식별합니다
• 그런 다음 nano LC-MS/MS 또는 UV LC-MS/MS를 사용하여 샘플을 분석합니다
• 얻은 펩타이드 커버리지/펩타이드 지도 전체 서열을 제공된 이론 서열과 비교합니다
• 비교 결과를 얻습니다
질량 분석법 펩타이드 커버리지/펩타이드 지도 전체 서열 측정의 장점:
（1）특이적 및 비특이적 효소의 조합을 통해 어떤 단백질(펩타이드)도 100% 커버리지로 식별할 수 있습니다.
（2）각 펩타이드의 확인은 1) 샘플 기반 질량; 2) 샘플 기반 MS/MS 지문을 포함하므로 단일 질량 분석만 사용하는 것보다 더 정확합니다.
샘플 요구사항:
겔 내 샘플과 용액 샘플은 모두 위의 서열 분석에 사용할 수 있습니다
샘플 순도는 높을수록 좋으며, 80% 이상의 단백질을 권장합니다
필요한 표적 단백질 샘플 양: 10-20ug
단백질 겔 샘플도 펩타이드 커버리지 측정에 사용할 수 있지만, 샘플에 대한 특별한 전처리가 필요합니다.
사례 분석:
단백질 샘플 100% 서열 검증 서비스
실제 실험 과정에서는 최대한 효율을 높이고 비용을 줄이는 원칙에 따라 고객이 제공한 이론 서열을 먼저 분석합니다. 분석 과정은 여러 효소 절단 위치에 따라 펩타이드 커버리지를 예측합니다. 만약 3가지 효소 절단만으로 100% 전 서열을 커버할 수 있다면, 실제 실험 과정에서는 이 3가지 효소를 먼저 사용하여 효소 절단 및 후속 서열 분석 실험을 진행하여 실험 비용을 효과적으로 줄일 수 있습니다. 다음은 이전 프로젝트의 일부 데이터입니다. 이 프로젝트에서는 고객이 이론 서열에 따라 항체 약물을 표현하였고, 일차 서열을 검증하여 표현된 항체가 이론 서열과 일치하는지 입증해야 했습니다. 일부 실험 데이터를 아래에 보여드립니다:
결과 보고서에서는 아래 그림에서처럼 펩타이드 커버리지의 상세 데이터를 제공합니다.
중/영문 프로젝트 보고서
기술 보고서에서는 바이오타이 팩이 중영문 이중 언어 기술 보고서를 제공하며, 보고서에는 다음이 포함됩니다:
1. 실험 절차 (중영문)
2. 관련 질량 분석 파라미터 (중영문)
3. 질량 분석 이미지
4. 원시 데이터
5. 생물 의약품 펩타이드 커버리지 정보
