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IEF 기반 단백질 등전위 분석

단백질 분자는 양쪽 전해질로, 용액의 산도와 알칼리도를 조절하여 단백질 분자가 지닌 양전하와 음전하가 같아질 때, 전기장에서 이 단백질 분자는 양극으로도 음극으로도 이동하지 않습니다. 이때 용액의 pH 값이 해당 단백질의 등전점(isoelectric point, pI)입니다. 단백질의 등전점은 그 아미노산 서열과 3차원 구조와 밀접한 관련이 있으며, 특정 단백질의 등전점은 고정되어 있으므로 서로 다른 단백질의 등전점을 비교하여 그 구조와 기능의 차이를 연구할 수 있습니다. 정확한 등전점 측정은 생물제품의 전하 이질성 특성화의 중요한 부분입니다.

등전 초점(IEF)은 단백질 등전점 분석에 매우 효과적인 기술입니다. 등전점에서 단백질 전하가 0이 되는 특성을 이용하여, 전하를 띤 단백질은 전기영동 중 극성이 반대인 방향으로 이동합니다. 등전점에 도달하면(해당 pH 값에서 단백질이 더 이상 전하를 띠지 않음) 전류가 최소가 되어 더 이상 이동하지 않으며, 이를 통해 생물제품의 등전점을 검출할 수 있습니다. 백태파크 바이오테크놀로지(BTP)는 CNAS/ISO9001 이중 품질 인증 체계를 통해 IEF 원리에 기반한 다양한 생물제품의 단백질 등전점 검출 플랫폼을 구축하여, 단백질, 항체, 백신, 펩타이드, 콜라겐 등등의 등전점을 정확하게 측정할 수 있습니다.

실험 기기

GE사의 Ettan IPGphor 3

기술 응용

cIEF에 기반한 등전점 분석은 280nm에서의 흡수 피크를 검출합니다. 280nm에서 흡수 피크가 없는 생물제품, 예를 들어 콜라겐의 경우, cIEF 방법은 적합하지 않습니다. IEF 방법은 280nm에서 흡수 피크가 없는 단백질의 등전점 검출을 보완하는 효과적인 방법이며, 콜라겐류 생물제품 및 의료 기기 특성화에 널리 사용됩니다.

사례 시연

실험 과정에서 한 개의 스트립은 마커를 테스트하는 데 사용되며, 사전 제작된 스트립의 pI 분포를 교정합니다. 다른 스트립은 샘플을 테스트하는 데 사용되며, 두 스트립은 동시에 등전 초점을 수행하여 시스템 오차를 줄입니다.

왼쪽은 pI 마커 결과, 오른쪽은 콜라겐 단백질 샘플 결과

전형적인 질문과 답변

질문1왜 대부분의 단백질의 등전점은 중성에 가깝고 산성인가요?

답변:단백질은 아미노산으로 구성되어 있으며, 대부분의 아미노산은 인체의 pH(pH=7.4)보다 낮은 등전점을 가지고 있습니다. 따라서 대부분의 단백질의 등전점은 산성에 가깝습니다. 예를 들어, 염소 위 펩신의 등전점은 약 3입니다.

질문2등전점이 염기성에 가까운 단백질도 있나요?

답변:pI가 염기성인 단백질도 존재합니다. 단백질 내의 염기성 아미노산, 예를 들어 히스티딘, 아르기닌, 라이신의 비율이 높으면 등전점이 염기성으로 치우칠 수 있습니다. 예를 들어, 어류 정자의 단백질 등전점은 약 12입니다.

질문3등전점 검사를 할 때, 두 가지 검사 방법 중 어떻게 선택하나요?

응답:CIEF 기반의 등전점 검출은 샘플이 280nm의 자외선 흡수를 가져야 합니다; 280nm의 자외선 흡수를 가지지 않는 샘플(예: 콜라겐)의 경우 IEF 기반의 등전점 검출을 수행합니다.

중/영문 프로젝트 보고서

기술 보고서에서 백태파크는 상세한 중영문 이중 언어 기술 보고서를 제공하며, 보고서에는 다음이 포함됩니다:

1. 실험 절차(중영문)
2. 관련 실험 매개 변수(중영문)
3. IEF 기반의 단백질 등전점 분석 상세 정보
4. 전기영동 이미지
5. 원시 데이터

IEF 기반의 단백질 등전점 분석 1원스톱 서비스

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바이오타이 파크의 원스톱 서비스는 샘플 처리-기기 분석-데이터 분석-프로젝트 보고서를 완료합니다