글리코시드 결합은 당단백질의 기능에 거의 영향을 미치지 않으므로 일반적으로 확인할 필요가 없습니다. 그러나 당단백질의 글리칸 구조는 매우 복잡하여 N-글리칸 결합의 입체 구조와 위치를 평가하는 것이 당단백질 구조 분석에 유용합니다. 가장 흔한 N-글리칸 결합 중 하나는 N-아세틸글루코사민이 아스파라긴(GlcNAcβ1-Asn)에 결합하는 것입니다. 아스파라긴과 결합하는 다른 유형으로는 포유류 및 고세균의 라미닌에 있는 글루코스, 고세균의 N-아세틸갈락토사민(GalNAc), 그리고 람노스 속 박테리아가 있습니다. 또한, 보고에 따르면, 단 옥수수에서 글루코스가 아르기닌과 연결된 경우도 있습니다.
HILIC-UHPLC를 이용한 N-글리칸 결합 분석
N-글리칸은 N-글리코시다제 F(Peptide N Glycosidase F, PNGase F) 반응에 의해 당단백질에서 가수분해됩니다. 가수분해된 N-글리칸은 2-아미노벤조아미드(2-AB)로 라벨링된 후 다양한 외부 글리코시다제에 의해 소화됩니다. 마지막으로, 친수성 상호작용 크로마토그래피(HILIC)와 형광 및 질량분석을 결합하여 글리칸을 분석합니다.
N-글리칸 결합 분석의 일반적인 단계
1. 샘플 준비
2. N-글리칸 가수분해
3. 2-AB 라벨링 및 라벨링된 글리칸과 일련의 외부 글리코시다제의 순차 반응
4. UPLC-HILIC-FLD 기반 분석
5. 또한 MS/MS 조각을 통해 상세한 글리칸 구조를 확인할 수 있습니다
내부 글리코시다제의 역할:
내부 글리코시다제는 당단백질이나 당지질에서 올리고당을 가수분해할 수 있습니다. 일반적으로 결합된 단백질 및 지질 분자에서는 올리고당을 가수분해하지 않습니다. 내부 글리코시다제는 두 당 단위 사이의 글리코시드 결합을 파괴하여 작용합니다.
내부 글리코시다제 H: 올리고 만노스와 혼합 N-글리칸을 가수분해
내부 글리코시다제 F: 단순한 이가 N-글리칸을 가수분해
