라우릴황산나트륨 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동(SDS-PAGE)은 단백질 발현 분석 등 연구 작업에서 자주 사용됩니다. 단백질 샘플의 전기영동 패턴을 얻기 위해 사용할 수 있으며, 다른 도구와 결합하여 사용됩니다.질량분석 기반 단백질 식별 서비스샘플을 분석하거나 정제하여 복잡한 생물학적 샘플의 단백질 스펙트럼 분석에 사용됩니다.
바이오테크 파커는 귀하의 요구에 따라 1D SDS-PAGE 또는 2D SDS-PAGE 기반의 단백질 분리 서비스를 제공합니다. 당사의 최적화된 표준 운영 절차에 따라 Bio-Rad Mini-PROTEAN® Tetra 겔 시스템을 사용하여 1D SDS-PAGE 단백질 분리를 수행합니다. 단백질 샘플(5-20 µg)을 로딩 버퍼로 희석하여 일정 농도로 만들고 가열합니다(끓는 물에서 5분). 샘플의 분석 목적에 따라 적절한 농도의 겔을 선택하여 샘플을 겔 웰에 로딩하고 전기영동 버퍼를 첨가합니다. 처음에는 80V 전압으로 15분 동안 정압 분리한 다음 120V 전압으로 60분 동안 정압 분리합니다. 분리가 완료되면 겔 판을 제거하고 겔을 쿠마시 브릴리언트 블루 염색 또는 은 염색합니다.
2D SDS-PAGE 단백질 분리는 IPG(pH 3-10) 겔을 사용하여 1차 등전점 집중을 수행하고, SDS-PAGE 겔 2차 전기영동으로 분자량(Mw) 분리를 통해 단백질을 분리합니다. 샘플은 초여과 튜브를 사용하여 정제한 후, 용액 체계를 2D 용해 버퍼(30 mM Tris-HCl, pH 8.8, 7 M 요소, 2 M 티오요소 및 4% CHAPS 포함)로 교체하여 등전점 집속을 수행합니다. 집속된 겔 스트립을 위로 향하게 하여 건조한 두꺼운 여과지에 놓고, 여분의 수분, 미네랄 오일 및 샘플을 제거합니다. 버퍼 용액에 15분 동안 팽창시킨 후, 균형 버퍼 용액에 15분 동안 균형을 맞춥니다. 겔 스트립을 위로 향하게 하여 긴 유리판에 올려놓고 낮은 융점의 아가로스로 밀봉한 후, 겔을 전기영동 탱크로 옮깁니다. 초기에는 낮은 전압을 사용하고, 샘플이 IPG 겔 스트립에서 완전히 나오고 선으로 집중되면 전압을 증가시킵니다. 브로모페놀 블루 지시제가 하단 가장자리에 도달하면 전기영동을 멈춥니다. 겔 판을 제거하고, 겔을 쿠마시 브릴리언트 블루 염색, 은 염색 또는 형광 염색합니다. Typhoon TRIO(GE Healthcare)를 사용하여 겔 이미지를 스캔하고, 스캔된 겔 이미지를 Image Quant 소프트웨어(버전 6.0, GE Healthcare)와 DeCyder 5.0(GE Healthcare)을 통해 분석합니다.
바이오테크 파커 2D SDS-PAGE 예시
샘플에 관하여:
1. 액체 또는 고체 샘플 모두 가능합니다.
2. 1D SDS-PAGE는 일반적으로 2-30 µg의 단백질이 필요하며, 2D SDS-PAGE는 일반적으로 50-1000 µg의 단백질이 필요합니다.
3. 쿠마시 브릴리언트 블루 염색, 은 염색 또는 형광 염색된 단백질 모두 가능합니다.
