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cIEF 기반 단백질 등전위점 분석

단백질의 등전점은 그 아미노산 서열과 3차원 구조와 밀접하게 관련되어 있으며, 특정 단백질의 등전점은 고정되어 있습니다. 따라서 서로 다른 단백질의 등전점을 비교함으로써 그 구조와 기능상의 차이를 연구할 수 있으며, 정확한 등전점 측정은 생물제품의 전하 이질성 특성화의 중요한 부분입니다.

모세관 등전점 전기영동(cIEF) 원리를 기반으로 한 단백질 등전점 분석은 생물제품의 등전점 검출에서 가장 많이 사용되는 방법입니다. 이 미세분리 기술의 기본 원리는 모세관의 양 끝에 직류 전압을 가하여, 관 내의 운반체 양성 전해질이 일정 범위의 pH 구배를 형성하게 하여, 단백질이 그에 따라 양극 또는 음극으로 이동하며 순전하가 0이 되는 pH 값(즉, 등전점 pI)에서 멈추는 것입니다. 결국 단백질이 매우 좁은 구간에 집중되어 분리의 목적을 달성하고 그 단백질의 등전점 정보를 얻습니다.

cIEF를 기반으로 한 단백질 등전점 검출은 분석 시간이 짧고, 해상도가 높으며, 반복성이 좋고, 정확도가 높으며, 샘플 사용량이 적습니다. 이는 다양한 아미노산, 펩타이드, 재조합 단백질, 항체 및 백신 등 생물제품 연구개발과 품질 관리에서 중요한 기술 중 하나가 되었습니다.

바이타이파크 생명공학 BTP는 CNAS/ISO9001 이중 품질 시스템 인증을 통과했습니다. 회사는 '중화인민공화국 약전' 2020년 판 3부 통칙 0542/4부 통칙 0542 모세관 전기영동법을 참조하여 cIEF 원리에 따라 다양한 종류의 생물제품에 대한 단백질 등전점 검출 플랫폼을 구축하였으며, 단백질, 항체, 백신, 펩타이드, 재조합 콜라겐 단백질 등의 생물제품의 등전점의 정확한 측정이 가능하며, 방법학의 구축, 검증 및 후속 샘플 검출을 포함한 전체 서비스를 제공합니다. BTP는 또한 기타생물제품 특성화관련 서비스를 제공하며, 자세한 내용을 보려면 클릭하십시오.

실험 장비

BECKMAN COULTER PA800+ 모세관 전기영동기

기술응용

cIEF는 분석 시간이 짧고, 해상도가 높으며, 반복성이 좋고, 정확도가 높고, 샘플 사용량이 적다는 장점이 있습니다. 이 방법은 다양한 아미노산, 펩타이드, 재조합 단백질, 항체, 백신 등 생물제품의 연구개발과 품질 관리에서 중요한 기술 중 하나가 되었습니다.

사례 시연

실험 과정에서 샘플을 양성 전해질 및 5종의 표준 pI 마커와 혼합하여 모세관 전기영동기로 검출합니다. 모세관에서 전기영동 집중을 통해 5종의 내부표준의 유지 시간을 기준으로 시험품의 등전점을 계산합니다.

그림 1 pI 마커 결과

그림 2 단항 샘플 검출 결과

일반적인질문과 답변

질문 1: 왜 대부분의 단백질의 등전점은 중성에서 산성에 가깝습니까?

답변: 단백질은 아미노산으로 구성되어 있으며, 대부분의 아미노산의 등전점은 인체 pH(pH=7.4)보다 낮습니다. 그래서 대부분의 단백질의 등전점은 산성에 가깝습니다. 예를 들어, 염소 위장 단백분해효소의 등전점은 약 3입니다.

질문 2: 등전점이 알칼리성인 단백질도 있습니까?

답변:알칼리성 pI를 갖는 단백질이 존재합니다. 단백질 내 알칼리성 아미노산, 예를 들어 히스티딘, 아르기닌, 라이신의 비율이 클 경우 등전점이 알칼리성이 됩니다. 예를 들어, 정어리 단백질의 등전점은 약 12입니다.

질문 3: 등전점 검출을 할 때 두 가지 검출 방법을 어떻게 선택해야 하나요?

답변:cIEF 기반의 등전점 검출은 샘플이 280nm의 자외선 흡수를 가지고 있어야 합니다. 280nm의 자외선 흡수가 없는 샘플(예: 콜라겐 단백질)은 IEF 기반의 등전점 검출을 사용합니다.

cIEF 기반 단백질 등전점 분석 원스톱 서비스

주문 후 샘플 발송만 하시면 됩니다
바이타이파크 원스톱 서비스 완료: 샘플 처리-기계 분석-데이터 분석-프로젝트 보고서