LC-MS를 기반으로 정량 분석을 어떻게 하나요? 또는 정량이란 무엇인가요?
LC-MS(액체 크로마토그래피-질량 분석 연계 기술) 정량 분석은 액체 크로마토그래피로 샘플의 성분을 분리하고 질량 분석으로 검출 및 정량하는 분석 방법입니다. 정량 분석의 핵심 목적은 알려진 표준 물질 또는 이미 구축된 표준 곡선을 통해 측정 물질의 농도를 계산하는 것입니다.
LC-MS 정량 분석의 기본 절차:
1. 샘플 준비
측정하려는 샘플을 용해하거나 희석하여 적절한 처리(예: 원심 분리, 필터링, 정제 등)를 통해 LC-MS 기기에서 효과적인 분석이 가능하도록 준비합니다.
2. 액체 크로마토그래피 분리
액체 크로마토그래피(LC)를 통해 샘플의 화학 성분을 분리하며, 크로마토그래피 컬럼은 각 화합물이 컬럼에서의 보유 시간(Retention Time, RT)에 따라 분리합니다.
3. 질량 분석 검출
질량 분석(MS)은 LC로 분리된 성분을 검출하며, LC-MS는 높은 민감도의 정성 및 정량 정보를 제공합니다. 질량 대 전하 비(m/z)를 통해 목표 화합물을 식별하고 정량할 수 있습니다.
4. 표준 곡선법
(1) 표준 곡선법은 LC-MS 정량 분석에서 가장 일반적으로 사용되는 정량 방법입니다. 먼저, 알려진 농도의 표준 용액(표준품)을 동일한 실험 조건에서 분석하여 다른 농도에서의 반응 신호(일반적으로 피크 면적 또는 피크 높이)를 얻은 후, 이 신호 데이터를 사용하여 표준 곡선(농도 대 피크 면적 또는 피크 높이)을 그립니다.
(2) 샘플을 LC-MS 분석한 후, 샘플의 반응 신호(피크 면적 또는 피크 높이)를 측정하고 이를 표준 곡선의 반응 신호와 비교하여 샘플 내 목표 분석물의 농도를 결정합니다.
5. 내부 표준법
(1) 표준 곡선을 제작하기 어려운 경우(예: 표준 물질이 비싸거나 얻기 어려운 경우)에는 내부 표준법을 사용하여 정량할 수 있습니다. 내부 표준법은 샘플에 알려진 농도의 내부 표준 물질(목표 화합물과 유사하지만 분석에 방해가 되지 않는 물질)을 추가하여 기기 변동이나 샘플 처리 중 손실을 보상합니다.
(2) 샘플에서 내부 표준과 목표 물질의 반응 비(즉, 피크 면적 비 또는 피크 높이 비)를 측정하여, 내부 표준의 농도와 반응을 통해 목표 화합물의 농도를 추정합니다.
6. 데이터 분석
전문 소프트웨어(예: MassLynx, Xcalibur, MZmine 등)를 사용하여 LC-MS 데이터를 처리하고, 목표 화합물의 질량 분석 데이터와 크로마토그래피 데이터를 추출하여 피크 식별 및 정량 분석을 수행합니다.
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