단백질 면역 블롯 및 전이 서비스

전기영동으로 분리된 단백질은 젤 매트릭스에서 멤브레인(보통 니트로셀룰로스 또는 PVDF)으로 전이되거나 '블로팅'되며, 그 후 멤브레인 표면에서 항체 기반의 검출이 이루어집니다. 이를 단백질 면역 블로팅(Western Blot 또는 immunoblotting)이라고 합니다. 바이오테크놀로지 회사인 바이테크 파크는 단백질 면역 블로팅 분석 서비스를 제공합니다. 단백질 면역 블로팅은 고선택성과 고감도의 항체-항원 상호작용을 통해 복잡한 단백질 혼합물에서 특정 목표 단백질을 검출하는 데 사용할 수 있으며, 예를 들어 조직 균질액 또는 세포 추출물 등에서 사용할 수 있습니다. 얻어진 데이터는 목표 단백질에 대한 정성 및 반정량 분석에 사용될 수 있습니다.

전기 전이 일반 흐름도

단백질 면역 블로팅은 조직 균질액 또는 추출물 샘플에서 특정 단백질을 검출하는 데 사용되는 널리 사용되는 단백질 분석 기술입니다. 단백질 면역 블로팅은 3차원 구조와 폴리펩타이드 사슬의 길이를 기준으로 천연 및 변성 단백질을 젤 전기영동을 통해 분리합니다. 분리된 단백질은 멤브레인(보통 니트로셀룰로스 또는 PVDF)으로 전이된 후, 목표 단백질에 특정적인 항체로 특이적으로 인식됩니다. Western Blot은 분자 생물학, 생화학, 면역유전학 및 기타 분자 생물학 분야에서 널리 사용됩니다.

단백질 면역 블로팅 분석에서, 먼저 다양한 방법을 사용하여SDS-PAGE등전점(pI), 분자량, 전하 또는 이러한 요소의 조합을 통해 샘플에서 젤 전기영동으로 단백질을 분리합니다. 일반적으로 SDS-PAGE를 통해 분리되며, 모든 단백질이 젤 내에서 용해되어 같은 방향으로 이동하기 때문에 SDS의 변성 작용과 결합하여 항원 표면이 더 쉽게 인식됩니다.

젤 전기영동 분석 후, 단백질을 젤에서 니트로셀룰로스 또는 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF)로 만든 멤브레인으로 전이하여 항체 검출에 사용합니다. PVDF 멤브레인은 단백질 결합 능력이 니트로셀룰로스보다 높지만, 니트로셀룰로스 멤브레인은 더 작은 단백질과 더 잘 결합합니다. 단백질 전이의 주요 방법은 전기 블로팅이며, 전기 블로팅은 전류를 사용하여 단백질을 젤에서 PVDF 또는 니트로셀룰로스 멤브레인으로 끌어옵니다. 전기 전이법에는 젖은 전이, 반건조 전이 및 반습 전이가 포함됩니다. 등전점 집중을 사용하여 단백질을 분리하는 경우, 압력 전이 확산을 사용하여 단백질을 전이하는 것이 더 효과적입니다.

전이 과정은 한 시간(반건조 전이)부터 밤새 전이(젖은 전이)까지 다양합니다. 전이가 완료되면, 멤브레인의 자유 결합 부위가 단백질 혼합물로 차단되어 후속 항체 검출이 방해받지 않습니다. 멤브레인에 전이된 단백질을 항체로 검출할 수 있습니다. 단백질을 포함한 멤브레인은 먼저 일차 항체와 배양되며, 그 후 일차 항체를 인식하는 이차 항체와 결합하여 검출됩니다. 이차 항체는 일반적으로 보고 그룹을 가지고 있으며 매우 높은 민감도를 가집니다.

가장 민감한 검출 방법은 향상된 화학 발광(ECL)입니다: 항체-레디쉬 복합체를 통해 일차 항체를 인식합니다. 향상된 화학 발광의 특별한 변형을 사용하면 1 pg의 단백질 밴드까지 검출할 수 있습니다.

단백질 면역 블로팅은 또한 추적하는 데 사용할 수 있습니다.단백질의 인산화와 결합하여 인산화된 단백질의 모든 아형에 대한 항체는 2차원 젤에서 '구슬 모양'의 외관을 나타냅니다. 또한 면역 공동 침전에 의해 생성된 복합체에서 알려진 단백질과 미지의 단백질을 식별하는 데 사용할 수 있으며, 목표 단백질이 젤에 있는 한, 코마시 브릴리언트 블루 염색을 통해 젤에서 해당 스팟을 잘라내어 후속 질량 분석을 수행할 수 있습니다.