질량 분석법 단백질 측정 단계 및 원리

질량 분석법(MS)은 생체 내 단백질을 검출하는 주요 기술 중 하나로, 생물 샘플의 단백질 및 펩타이드의 상대 분자량, 아미노산 서열 및 번역 후 변형을 정확하게 검출할 수 있습니다. 높은 민감도, 정확성 및 자동화 수준으로 인해 단백질 분석 분야에서 널리 사용됩니다. 질량 분석법을 통해 단백질을 측정하는 단계와 원리는 다음과 같습니다.

질량 분석법으로 단백질을 측정하는 주요 단계는 단백질 샘플 준비, 단백질 효소 분해, 질량 분석, 데이터베이스 검색 및 단백질 동정 등을 포함합니다.

1. 단백질 샘플 준비: 단백질 샘플은 단순 및 복합 단백질 샘플로 나뉘며, 단순 샘플에는 이차원 전기영동 점 또는 정제된 단백질(SDS-PAGE 젤 스트립 또는 단백질 용액, 순도＞90%) 등이 포함됩니다. 복합 단백질 샘플에는 혼합 단백질 용액 또는 SDS-PAGE 밴드 등이 포함됩니다.

2. 단백질 효소 분해: 단백질의 질량이 커서 식별에 불리하므로, 질량 분석 전에 단백질을 효소로 작은 펩타이드 조각으로 분해해야 합니다. 일반적으로 단백질을 6-20개의 아미노산 펩타이드 조각으로 분해하는 것이 단백질 질량 분석에 가장 적합합니다. 일반적으로 사용되는 효소는 트립신(trypsin)이며, 이는 단백질의 라이신(lysine) 및 아르지닌(arginine) 위치에서 단백질을 절단합니다.

3. 질량 분석: 일반적으로 단순 단백질 샘플은 연속 질량 분석(MS/MS)으로 검출하고, 혼합 단백질 샘플은 액체 크로마토그래피 연속 질량 분석(LC-MS/MS)으로 검출할 수 있습니다.

4. 단백질 데이터베이스 검색 및 단백질 동정: 데이터베이스 검색 소프트웨어를 사용하여 실제 검출된 질량 분석 데이터를 분석하고 식별하는데, 평가 점수가 특정 임계값을 초과하면 질량 분석 식별이 성공적으로 판단되고, 그렇지 않으면 식별 실패로 간주됩니다.

단백질 질량 분석 식별의 기본 원리는 단백질을 효소로 펩타이드 혼합물로 분해하고, MAILDI 또는 ESI 등의 소프트 이온화 방법을 통해 펩타이드 혼합물을 이온화한 후, 질량 분석기를 통해 특정 질량 대 전하 비를 가진 펩타이드 이온을 분리하는 것입니다. 실제 스펙트럼과 이론적으로 단백질이 효소 분해 후 생성되는 1차 질량 스펙트럼 및 2차 질량 스펙트럼을 비교하여 단백질을 식별합니다.

바이오테크 바이오테크놀로지는 Orbitrap Fusion 질량 분석 플랫폼과 Orbitrap Fusion Lumos 질량 분석 플랫폼을 Nano-LC와 결합하여 낮은 농도의 펩타이드 파편 식별의 민감도를 보장합니다. 또한, 펩타이드 파편화 과정에서 HCD와 ETD를 결합한 모드를 채택하여 펩타이드 파편의 완전성을 보장합니다. 이를 통해단백질 샘플의 N말단 및 C말단 서열 분석，단백질 전체 길이 서열 분석을 실현할 수 있습니다. 알려지지 않은 이론적 서열의 샘플에 대해서는 디노보 시퀀싱을 통해 서열 분석을 수행할 수 있습니다. 귀하는 요구 사항 및 샘플을 당사에 보내주시면, 우리는 샘플 전처리, 질량 분석, 질량 분석 원시 데이터 분석 및 오믹스 분석을 포함한 프로젝트의 모든 절차를 처리합니다.