고효율 액체 크로마토그래피 기기는 어떻게 작동합니까? 고효율 액체 측정으로 함량을 어떻게 측정하고, 약물 적재율을 어떻게 계산합니까?
1. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 작동 단계는 다음과 같습니다.
1. 전원 켜기 및 준비
(1) 전원 켜기: HPLC 시스템의 전원을 켭니다. 여기에는 펌프, 검출기, 자동 주입기(있는 경우) 및 컴퓨터 소프트웨어가 포함됩니다.
(2) 이동상 준비: 필요한 이동상을 조제하고 탈기 처리를 합니다(초음파기 사용 또는 시스템 자체의 온라인 탈기 장치 사용). 이동상이 깨끗하고 기포가 없는지 확인합니다.
(3) 칼럼 설치: 적합한 칼럼(예: C18 역상 칼럼)을 선택하여 크로마토그래피 시스템에 설치합니다. 연결이 견고하고 기포가 없는지 확인합니다.
(4) 배관 세척: 펌프를 낮은 유속(예: 0.1 mL/min)으로 켜서 이동상을 시스템에 흐르게 하여 배관과 칼럼을 세척하고 공기를 제거합니다.
2. 시스템 매개변수 설정
(1) 유속 설정: 실험 요구에 따라 이동상의 유속을 설정합니다. 일반적으로 0.5-1 mL/min입니다.
(2) 칼럼 온도 설정: 온도 제어가 필요한 경우 칼럼 온도를 설정합니다(일반적으로 25-40°C). 실험 요구에 따라 조정합니다.
(3) 검출기 설정: 검출기(예: UV-Vis)를 선택하고 목표 화합물에 적합한 파장을 설정합니다(예: 254 nm, 280 nm 등). 질량 분석기(MS)를 사용하는 경우 이온 소스 매개변수 등을 설정합니다.
3. 시스템 평형
(1) 시스템 예비 세척: 샘플 주입 전에 이동상을 사용하여 시스템과 칼럼을 세척합니다. 일반적으로 20-30분 동안 평형을 유지하여 기준선이 안정될 때까지 기다립니다.
(2) 기준선 확인: 소프트웨어를 통해 검출기의 기준선 안정성을 모니터링하여 잡음이 없고 큰 변동이 없는지 확인합니다.
4. 샘플 주입
(1) 샘플 준비: 샘플을 이동상과 호환되는 용매에 용해시킨 후 필터(0.22 μm 또는 0.45 μm)를 사용하여 샘플을 여과하여 입자로 인한 칼럼 막힘을 방지합니다.
(2) 주입: 수동 주입 또는 자동 주입기를 사용하여 샘플을 주입하고 주입 부피를 설정합니다(일반적으로 10-20 μL).
(3) 샘플 분석: 샘플 분석을 시작하면 HPLC 시스템이 사전에 설정된 프로그램에 따라 샘플의 구성 성분을 분리합니다.
5. 데이터 수집
(1) 크로마토그램 모니터링: 소프트웨어를 통해 크로마토그램을 실시간으로 관찰하고 목표 화합물의 유지 시간, 피크 면적 등의 데이터를 기록합니다.
(2) 데이터 저장: 분석이 완료되면 크로마토그래피 데이터를 저장하여 후속 정량 또는 정성 분석에 사용합니다.
6. 실험 종료 및 세척
(1) 시스템 세척: 분석 완료 후 고비율 유기 용매(예: 아세토니트릴 또는 메탄올)를 사용하여 시스템과 칼럼을 세척하여 이동상 잔류물이 칼럼을 막거나 성능을 저하하지 않도록 합니다.
(2) 칼럼 보관: 장기간 사용하지 않을 경우, 설명에 따라 칼럼을 적절한 보관 용액(일반적으로 메탄올)으로 세척하여 보관합니다.
7. 전원 끄기
(1) 펌프 작동 중지: 펌프를 끄고 이동상 공급을 멈춥니다.
(2) 시스템 종료: HPLC 기기와 검출기를 끄고 마지막으로 소프트웨어와 컴퓨터를 종료합니다.
2. 고성능 액체 크로마토그래피를 이용한 함량 측정 과정은 일반적으로 다음과 같습니다.
1. 알려진 농도의 표준품을 사용하여 다양한 농도의 용액을 제조한 후 고성능 액체 크로마토그래피 분석을 수행하여 각 농도에서의 피크 면적을 얻고 표준 곡선을 그립니다.
2. 동일한 방법으로 샘플의 피크 면적을 측정한 후 표준 곡선을 이용하여 샘플 중 측정 대상 물질의 농도를 결정합니다.
3.약물 적재율의 계산
1. 약물 적재율 정의: 약물 적재율은 운반체(예: 나노 입자, 리포좀)에서 약물의 질량이 약물-운반체 복합체의 총 질량에서 차지하는 비율을 백분율로 나타낸 것입니다.
2. 약물 질량 측정: HPLC를 사용하여 복합체 내 약물 농도를 측정합니다.
3. 운반체와 약물 총 질량: 일반적으로 복합체 제조 시 알려진 운반체 질량과 약물의 총 질량입니다.
4. 약물 적재율 계산 공식: 약물 적재율(%) = (실제 적재 약물 질량 / 운반체 질량)×100%
예를 들어, 운반체 질량이 100mg이고 실제 적재 약물 질량이 10mg인 경우 약물 적재율은 10%입니다.
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