풀다운 실버 염색

실버 스테인(silver stain)은 폴리아크릴아마이드 젤에서 단백질을 염색하는 과정으로, 알칼리 조건에서 폼알데하이드는 단백질 밴드의 질산은(은 이온)을 금속 은으로 환원하여 은 입자가 단백질 밴드에 침전되도록 염색합니다. 염색의 정도는 단백질 중 일부 특수한 기에 관련이 있으며, 시스테인 잔기가 없거나 적은 단백질은 때때로 음성 염색을 나타냅니다.

Pull-down 실버 스테인(Pull-down silver stain)은 Pull-down 샘플을 라우릴황산나트륨 폴리아크릴아마이드 젤(SDS-PAGE) 전기영동으로 분리한 후 실버 스테인을 하는 과정입니다. Pull-down 산물을 SDS-PAGE 젤 전기영동한 후 실버 스테인을 선택할 수 있으며, 실버 스테인은 코마씨 블루 염색에 비해 산물이 적고 민감도가 높은 등의 장점이 있습니다. 실버 스테인 시약에는 글루타르알데하이드를 사용할 수 없는데, 이는 단백질을 변형시켜 후속 단백질 식별에 영향을 미치기 때문입니다.

질량분석에서 실버 스테인 단백질 젤 스트립의 절단 요구사항: 단일 단백질 밴드를 검출하려면 해당 단백질 밴드 위치만 절단하면 됩니다; 여러 단백질 밴드를 검출하려면 각각 절단 후 합쳐야 합니다; 전체 경로 단백질을 검출하려면 샘플을 짧은 시간 동안 농축 젤 또는 분리 젤을 실행한 후 절단하여 검출하는 것이 좋습니다. 염색은 색상이 너무 진할 필요가 없으며(탈색은 오히려 시간이 소요됩니다), 염색 없이 직접 고정할 수도 있습니다.

실버 스테인 젤 스트립을 식별하는 것은 정성 분석의 일종이며, 정량 분석이 아닙니다. 일반적으로 실버 스테인 샘플 분석의 성공률은 약 90%입니다. 이는 일부 실버 스테인 과정이 단백질과 폴리아크릴아마이드 젤 매트릭스 간의 교차 결합을 유발하여 단백질을 젤에서 추출할 수 없기 때문입니다. 실버 스테인 샘플의 단백질 함량이 단백질 식별에 필요한 최소량(1ng 이상)보다 낮으면 질량분석에 사용할 수 없습니다.

백테크 바이오테크놀로지는 수입된 GST pull-down 키트를 사용하여 고급 UPLC-MS 질량분석 플랫폼과 결합하여 빠르고 정확한Pull-down 타겟 단백질 질량분석 식별원스톱 기술 서비스로, 실버 스테인 및 코마씨 블루 염색과 같은 Pull-down 단백질 샘플에 대해 정밀한 질량분석 식별을 수행할 수 있습니다. 귀하는 단지 귀하의 요구를 우리에게 알려주고 샘플을 보내기만 하면 됩니다. 우리는 샘플 전처리, Pull down, 질량분석, 질량분석 원시 데이터 분석 등 프로젝트의 후속 모든 사항을 책임질 것입니다.