표준 풀다운 분석에는 재조합 친화 태그가 포함된 정제된 단백질이 필요하며, 이 태그는 '미끼'로 작용하고 태그 특이적 친화 리간드에 고정됩니다. 그런 다음 다른 단백질 또는 '먹이' 단백질을 '미끼' 단백질과 함께 배양합니다. 두 단백질 간의 물리적 상호작용이 발생하면 '먹이' 단백질이 '미끼' 단백질에 의해 포획됩니다. 이후, 친화 리간드에 따라 상호작용한 '먹이' 단백질을 용출 버퍼를 사용하여 용출할 수 있습니다. 마지막으로, '먹이'와 '미끼' 단백질은 나트륨 도데실 황산염-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)을 통해 분리할 수 있으며, 그 후 젤 염색 및 단백질 블롯팅을 통해 검출할 수 있습니다.
GST 풀다운 융합 단백질 침강 기술은 GST 태그가 있는 벡터를 목표 단백질 A에 삽입하여 글루타티온이 코팅된 비드와 결합시키는 방법입니다. 그런 다음 세포 용해액을 첨가하여 상호작용하는 단백질이 융합 단백질에 흡착되도록 합니다. 과량의 글루타티온을 첨가하여 용출하고, 용출된 샘플은 질량 분석을 통해 분석 및 식별됩니다. GST 풀다운 융합 단백질 침강 기술은 주로 체외에서 강하거나 안정적인 단백질 간 상호작용을 연구하는 데 사용됩니다. 두 가지 관심 있는 단백질 간의 직접적인 상호작용을 확인하거나, 목표 단백질과 상호작용할 가능성이 있는 미지의 단백질을 찾을 수 있습니다.
단백질 간의 상호작용을 확인하는 것 외에도, GST 풀다운 융합 단백질 침강 기술은 단백질 상호작용의 조건을 특성화하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 단백질 도메인 절단법을 사용하여 풀다운 분석을 수행하면 단백질 상호작용에 중요한 기능 영역을 확인할 수 있습니다. 또한, GST 풀다운 융합 단백질 침강 기술은 목표 단백질 상호작용의 동반자를 탐색하는 데 사용할 수 있으며, '미끼' 단백질을 혼합 단백질 용액이나 세포/조직 추출물과 함께 배양합니다. 세척 후, 고속으로 용출하여 결합된 단백질을 질량 분석을 통해 식별할 수 있습니다.
선도적인 오믹스 기술 서비스 회사로서, 바이타이파크 바이오테크놀로지는 질량 분석 기반의 단백질 상호작용 분석에 다년간의 경험을 보유하고 있습니다. 바이타이파크는 단백질 발현 및 정제를 위한 효율적인 전략을 제공하며, 풀다운 단백질 상호작용 분석을 위한 최적의 솔루션을 제공합니다. 우리는 엄격한 품질 관리와 짧은 검사 주기를 특징으로 하여 고객의 소중한 시간과 예산을 절약하기 위해 맞춤형 원스톱 서비스를 제공하며, 프로젝트의 유전자 합성에서 데이터 보고서까지 모든 단계를 포함합니다.
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