교차 결합법 단백질 상호작용 분석

생리 조건에서 대부분의 단백질 간 상호작용은 지속 시간이 매우 짧아 상호작용 연구가 어렵습니다. 교차결합 시약은 이 문제에 대한 해결책을 제공하여 단백질이 상호작용할 때 이를 공유결합으로 결합시켜 단백질-단백질 복합체를 포착하고, 일시적이고 약한 상호작용을 얼어붙게 하여 일시적 상호작용 단백질의 분리 및 특성화를 실현할 수 있습니다. 교차결합 과정은 생체 내 또는 생체 외에서 수행할 수 있으며, 프로젝트의 요구에 따라 생체 내 또는 생체 외 교차결합을 사용할 수 있습니다. 두 방법의 차이점은 생체 내 교차결합 동안 단백질이 자연 상태로 교차결합되는 반면, 생체 외 교차결합에서는 단백질이 변성될 수 있다는 점입니다.

생체 내 교차결합
생체 내 교차결합 반응 과정에서 단백질 교차결합 반응은 세포 내부에서 발생하므로 위양성 상호작용 및 단백질 복합체 안정성 손실의 위험성을 제거할 수 있습니다. 세포막 내에 위치한 단백질은 보통 소수성 및 지용성 교차결합제를 사용하여 교차결합 반응을 수행하며, 세포막에 위치한 단백질(예: 혈장에 앵커된 수용체)은 보통 친수성 및 수용성 교차결합제를 사용하여 교차결합 반응을 수행합니다. 단백질이 자연 상태를 유지하더라도 세포 내 단백질의 복잡성으로 인해 생체 내 교차결합의 최적화 과정은 복잡할 수 있으며, 비특이적 교차결합 반응이 발생할 가능성이 있습니다. 이는 간격 팔이 짧은 교차결합제를 사용하여 비특이적 교차결합 문제를 해결할 수 있습니다.

생체 외 교차결합
생체 외 교차결합 과정에서는 세포가 균질화되고 용해됩니다. 따라서 이 방법은 더 안정적인 단백질-단백질 상호작용 분석에 더 적합합니다. 특정 용해 버퍼에서 세포를 용해하기 때문에 반응 조건을 제어하는 것이 비교적 쉽습니다. 예를 들어 온도, pH, 이온 강도 등의 반응 조건을 조정할 수 있습니다. 생체 내 환경의 제한을 받지 않기 때문에 사용할 수 있는 교차결합제의 유형이 더 많고, 비특이적 교차결합을 더 잘 제어할 수 있습니다.

Dülsner, E. et al. Nat Methods. 2009. 

교차결합법 단백질 상호작용 분석

 

일반적인 교차결합 유형

화학적 교차결합
화학적 교차결합제는 특정 아미노산 작용기를 통해 두 개 이상의 생체 분자를 화학적으로 결합하여 상호작용하는 단백질, 도메인 또는 펩타이드를 공유결합으로 연결합니다. 프로젝트의 구체적인 요구에 따라 많은 상용 화학적 교차결합제를 선택할 수 있습니다. 이는 동종 이중 기능 또는 이종 이중 기능 교차결합제, 긴 팔 또는 짧은 팔 교차결합제, 가용성 또는 비가용성 교차결합제 등을 포함합니다. 동종 이중 기능 분자는 단백질의 동일한 기능 그룹을 표적으로 삼고, 이종 이중 기능 교차결합제는 서로 다른 단백질의 서로 다른 기능기를 표적으로 삼아 더 큰 변이성 또는 특이적 교차결합을 실현할 수 있습니다. 교차결합제 분자는 에스터 또는 이황화 결합과 같은 가용성 요소를 포함하도록 설계될 수 있으며, 이는 각각 하이드록실아민 또는 환원제를 추가하여 결합을 역전시키거나 파괴할 수 있습니다. 소수성 교차결합제는 소수성 단백질 도메인에 침투하거나 세포막을 통과할 수 있고, 친수성 교차결합제는 수성 환경에서 교차결합을 제한할 수 있습니다.

광감응 교차결합
교차결합제를 세포 현탁액 또는 세포 용해물에 추가하면 많은 비특이적 교차결합이 형성될 수 있으므로, 단백질-단백질 상호작용을 더 잘 분석하기 위해 광감응 그룹을 추가하는 등의 방법으로 더 복잡한 교차결합제를 설계했습니다. 이 광감응 그룹은 선택된 시간에만 반응하며 자외선 조사를 받아야만 반응합니다. 한 쪽 끝에 화학적 교차결합 그룹이 있고 다른 쪽 끝에 광감응 그룹이 있는 이종 이중 기능 교차결합제는 선택된 목표 단백질과 두 단계로 반응할 수 있습니다.

교차결합법 단백질 상호작용 분석의 특징

생체 내 일시적인 단백질 간 상호작용을 분석할 수 있습니다.
저친화력 생체 외 단백질 간 상호작용을 분석할 수 있습니다.
높은 검출 감도

교차결합법 단백질 상호작용 분석의 일반적인 작업 흐름

특정 프로젝트 요구에 따라 교차결합 방법 및 교차결합제 유형을 설계하십시오: 생체 내/생체 외;
반응 조건 최적화, 샘플 특성 및 프로젝트 요구에 따라 실험 조건을 최적화합니다.
세포 용해 및 CoIP;
단백질 면역 블로팅/질량 분석(프로젝트 요구에 따라 다름);
데이터 분석 및 보고서 제출.

교차결합법 단백질 상호작용 분석 원스톱 서비스

주문 후 샘플을 보내기만 하면 됩니다.
백타이팩의 원스톱 서비스 완료: 샘플 처리-기계 분석-데이터 분석-프로젝트 보고서