파 서부 블롯 분석

Far-Western Blot은 Western Blot 기술에 기반한 분자 생물학적 방법으로, in vitro에서 단백질 간 상호작용을 탐지하는데 사용되며, 특히 목표 단백질의 자연 구조가 필요 없는 상호작용을 탐지할 수 있습니다.

Far-Western Blot 기술의 전체 작업 흐름은 Western Blot과 유사하지만, Western Blot에서는 목표 단백질을 탐지하기 위해 항체가 필요하고, Far-Western Blot 분석에서는 항체가 필요하지 않습니다. 대신 정제되고 라벨링된 '미끼' 단백질을 사용하여 막 위의 목표 단백질을 탐지합니다. Western Blot과 Far-Western Blot 모두에서 단백질은 SDS 겔과 native PAGE 겔을 통해 샘플을 분리한 후, 단백질을 겔에서 막으로 전이합니다. 전이 후, BSA로 차단합니다. 막 위에서 단백질을 변성 및 재구성하고 후속 탐지 단계를 수행합니다. Far-Western Blot 기술은 상업적으로 고도로 정제된 미끼 단백질로 막에 탐침을 라벨링합니다. 미끼 단백질이 목표 단백질과 반응한 후, 사용된 미끼 단백질에 따라 해당 목표 단백질에 대응하는 밴드를 탐지할 수 있습니다.

주어진 단백질과 상호작용하는 단백질을 식별하기 위해 Far-Western Blot은 실험 비용이 낮고 민감도가 높은 효과적인 플랫폼입니다. Far-Western Blotting의 원리는 자연적으로 접힌 재조합 단백질을 첫 번째 탐침으로 사용하여 PVDF 막에 전이된 단백질과 상호작용하는 Western Blotting의 개선된 방법입니다. Far-Western Blot에서는 두 번째 탐침으로 주어진 단백질에 대한 특이적 항체를 사용하고, 세 번째 탐침으로는 두 번째 탐침에 대한 항체에 효소를 결합한 것을 사용합니다. LC-MS-MS 단백질 식별과 결합하면 얻어진 단백질 점(또는 밴드)을 특성화할 수 있으며, 그 후 단백질 면역 침전 등의 추가적인 기능 분석을 수행할 수 있습니다.

Far-Western Blot 분석 시, 단백질의 자연적 구조와 자연적 상호작용을 보존해야 할 때 다음 문제에 주의해야 합니다: 1) SDS 겔에서 변성 조건 하에 분리된 단백질은 변성이 발생할 수 있으며, 변성된 단백질은 미끼 단백질과 반응하지 않을 수 있어 상호작용을 인식할 수 없습니다. 2) 결합 전에 단백질을 변성 및 재구성하면 단백질의 구조적 변화가 발생하여 표적 단백질과 미끼 단백질의 결합에 영향을 줄 수 있습니다. 3) 결합 부위가 다른 요인에 의해 영향을 받아 미끼 단백질과의 결합 능력을 상실하면, 미끼 단백질이 반응하지 못해 상호작용 탐지가 실패할 수도 있습니다. 더 어려운 것은 비자연적 구조로 제시된 단백질이 새로운 비자연적 방식으로 상호작용하여 탐지의 위양성을 초래할 수 있다는 점입니다.

백태파크 생명공학은 Far-Western Blot 분석 서비스를 제공하며, 귀하의 요구에 따라 실험을 맞춤화하고 결과에 영향을 미칠 수 있는 잠재적 요인을 평가합니다. 우리는 신뢰할 수 있는 데이터와 높은 재현성을 보장합니다.

Far-Western Blot 분석

Far-Western Blot 분석의 장점

• in vitro 단백질 상호작용 연구에 사용 가능

• 단백질 결합 영역 분석

• 단백질 결합 친화도 비교

• 특이적 항체 불필요

Far-Western Blot 분석의 작업 흐름

1. 단백질을 정량하고 SDS 또는 native PAGE로 분리
2. 단백질을 겔에서 막으로 전이
3. 단백질을 변성 및 재구성하여 막 위의 단백질 결합 부위를 충분히 노출
4. BSA 용액으로 막을 차단
5. 정제된 미끼 단백질과 막을 인큐베이션
6. 미끼 단백질 신호 탐지
7. 이미지 분석 및 보고서 전달