평행 반응 모니터링(PRM)은 고해상도 및 고정밀 질량 분석을 기반으로 한 이온 모니터링 기술입니다. PRM 기술은 SRM/MRM 원리와 유사하지만, 분석 방법 개발에서는 주로 단백질과 펩타이드의 절대 정량에 사용됩니다. PRM 기술은 복잡한 샘플에서 attomole 수준의 다양한 단백질을 검출할 수 있습니다.
평행 반응 모니터링(PRM)
PRM은 Q-Orbitrap을 기반으로 하는 사중극자 고해상도 질량 분석 검출 플랫폼입니다. SRM에서 매번 하나의 전이를 수행하는 것과 달리, PRM은 전구체 이온에 대해 매번 전이를 전체 스캔합니다. 즉, 전구체 이온의 모든 조각을 동시에 모니터링합니다. 먼저, PRM은 사중극자(Q1)를 사용하여 전구체 이온을 선택하고, 선택 범위는 일반적으로 m/z ≤ 2입니다. 그런 다음, 전구체 이온이 충돌 셀(Q2)에서 파괴됩니다. 마지막으로, Orbitrap이 Q3를 대체하여 모든 파괴된 이온을 고해상도 및 고정밀도로 스캔합니다. 따라서, PRM 기술은 SRM/MRM의 목표 정량 분석 능력을 가지고 있을 뿐만 아니라 정성 분석 능력도 가지고 있습니다.
PRM의 장점
1. 질량 정밀도가 ppm 수준에 도달하여 SRM/MRM보다 더 나은 배경 간섭 및 위양성 문제를 제거하여 복잡한 배경에서의 검출 한계와 민감도를 효과적으로 향상시킵니다.
2. 산물 이온에 대한 전체 스캔을 수행하여 이온 쌍을 선택할 필요가 없어 분석 방법의 설정이 더 쉽습니다.
3. 더 넓은 선형 범위: 5-6자리 숫자로 증가합니다.
SRM/MRM 기술의 장점
• 높은 민감도;
• 높은 생산성;
• 분석 방법이 개발하기 쉽습니다.
백태파크 바이오테크놀로지의 평행 반응 모니터링 PRM 분석 주요 과정:
1. PRM 분석 방법 개발: 먼저, 질량 분석 라이브러리에서 생성하거나 Skyline 소프트웨어에서 2개 또는 3개의 타겟 펩타이드를 선택합니다. 선택한 펩타이드는 목표 단백질에 대해 고유해야 하며, LC-MS를 통해 쉽게 검출할 수 있어야 하며, 잘린 부위가 없어야 하고 여러 번 수정된 아미노산이 없어야 합니다. 둘째, x축-농도 비율, y축-피크 면적 비율에 따라 표준 곡선을 설정합니다.
2. 질량 분석: 가수분해된 샘플은 Thermo사의 최신 Obitrap Fusion Lumos 질량 분석기를 사용하여 질량 분석을 수행합니다.
3. 데이터 분석: Skyline 소프트웨어를 사용하여 데이터 분석을 수행합니다.
PRM의 적용
• iTRAQ에서 차별화된 단백질의 검증;
• 라벨 프리(Label Free) 비표지 차별화된 단백질의 검증;
• 펩타이드와 단백질의 절대 정량;
• 질병 지표의 정량화 및 진단 모델 구축;
• 인산화 단백질 정량, 메틸화 단백질 정량;
• 기타 번역 후 수정된 단백질 정량;
• 대사 경로 정량 분석.
