1D SDS-PAGE 및 IEF 서비스

백태파크 생명공학은 SDS-PAGE, IEF, Native PAGE 분석을 포함한 원스톱 단백질 젤 서비스 솔루션을 제공합니다.

1D SDS-PAGE 서비스

폴리아크릴아마이드 겔 전기영동(PAGE)은 DNA, RNA, 단백질 등 대분자를 분리하는 가장 일반적인 기술 중 하나입니다. 전기영동 과정은 전기장을 가하여 전하를 띤 이온이 이동하는 과정입니다. 이 기술에서는 전하를 띤 분자의 이동도는 순전하와 통과하는 용액의 저항에 비례합니다. 도데실황산나트륨(SDS)은 음이온 계면활성제로, 용해 과정에서 넓은 pH 범위에서 순 음전하를 가집니다. 폴리펩타이드 사슬은 상대 분자량에 비례하여 일정량의 SDS와 결합하며, SDS의 음전하는 단백질의 대부분의 복잡한 구조를 파괴합니다.

 

1D SDS-PAGE

단백질 혼합물을 젤의 샘플링 구멍에 추가한 후, 가장 큰 단백질이 젤에 도달하기 전에 가장 작은 단백질이 이미 젤을 빠져나갈 수 있습니다. 따라서 더 나은 분리 효과를 얻기 위해 젤의 특성을 활용하여 농축 젤과 분리 젤 두 층으로 젤을 나누는 방법이 이 문제를 해결할 수 있습니다. PAGE 젤 하단은 더 큰 분리 젤이고, 상단은 더 좁은 농축 젤입니다. 전기영동 완충액은 글리신으로 만들어졌으며, pH 8.3이고, 농축 젤의 pH 값은 6.8이며, 분리 젤의 pH 값은 8.8입니다. 전기영동 동안 전류는 음전하를 띤 분자가 동일한 방향으로 이동하여 운반됩니다. pH 8.3에서 글리신 분자의 약 10%만이 음전하를 띠기 때문에 이곳의 전류는 주로 집적 완충액의 Cl-에 의해 운반되며, Cl- 이온은 단백질보다 먼저 집적 젤 하단으로 이동합니다. 따라서 SDS로 둘러싸인 단백질 분자는 위의 글리신 분자와 아래의 Cl- 사이에 끼어져 처음 로딩된 부피보다 훨씬 작은 밴드로 농축됩니다.

전류의 작용으로 이동하면서 단백질은 분리 젤로 이동합니다. 이때, pH 8.8의 분리 젤 완충액의 글리신은 음전하를 띤 분자가 되어 매우 빠르게 이동하며 거의 Cl- 이온과 일치하게 됩니다. 단백질은 그 뒤를 따르며 Cl-와 글리신 음이온의 이동 경로를 통해 분리 젤로 들어가 전류를 운반합니다. 단백질은 유사한 유체역학적 성질을 가지는 막대 모양의 음전하 고분자로 변하고, 그 이동도는 분자량에만 의존하게 됩니다.

SDS-PAGE는 널리 응용됩니다단백질체학 분석, 포함하여단백질 분자량 측정，단백질 정체, 샘플 순도 분석,이황화 결합 정체，단백질 정량등.

등전 집중 IEF 분석 서비스

등전 집중(IEF)은 단백질 등전점(pI)에 기반하여 단백질을 분리하는 전기영동 기술입니다. pI=pH일 때, 단백질의 순전하는 0이므로 단백질은 전기장에서 이동하지 않습니다. IEF에서는 단백질의 분리가 양성이온과 음성이온의 혼합물로 구성된 폴리아크릴아마이드나 아가로스 젤에서 이루어지며, 양성이온과 음성이온은 전기장에서 이동해 젤에 pH 구배를 형성합니다. 단백질 분자는 pH 구배의 매질에 집중되고, 매질의 전류가 양전하의 산화극과 음전하의 환원극을 생성합니다. 전하를 띤 단백질 분자는 반대 전하의 극으로 이동하며, 주변의 pH 값이 등전점과 같아질 때까지 이동이 멈춥니다. 즉, 단백질의 순전하가 0이 될 때까지입니다.

따라서 동일한 등전점을 가진 단백질은 고정된 pH 밴드에 집중됩니다. 각 단백질은 pH 구배에서 그들의 pI에 대응하는 위치에 자리잡습니다. IEF 기술은 매우 높은 해상도를 가지며, 단 하나의 전하 차이가 있는 단백질도 다른 밴드로 분리됩니다.

Baudin, B. Gel Electrophoresis - Principles and Basics. 2012.

등전 집중 IEF 분석