변성되지 않은 단백질은 더 쉽게 분해될까요? 추출한 단백질을 -80°C에서 얼마나 오래 보관할 수 있나요?

두 가지 측면을 구분해야 합니다: 단백질 자체 구조 상태와 보관 조건이 안정성에 미치는 영향입니다.

 

1. 변성되지 않은 단백질의 분해 위험

• 자연 형태의 단백질은 완전한 공간 구조를 유지하며 보통 활동성을 가지고 있습니다. 용액에 남아 있는 단백질 분해효소나 미량 금속 이온이 있을 경우, 이러한 단백질은 쉽게 인식되고 절단되어 분해 속도가 빠릅니다.

• 변성 처리(예: SDS, 요소, 가열)는 구조와 활성을 잃게 하며, 대부분의 단백질 분해효소는 절단하기 어렵지만, 변성 상태는 기능 검토나 구조 연구에 적합하지 않습니다.

• 따라서, 변성되지 않은 단백질은 단백질 분해효소의 활성을 엄격히 억제해야 하며(단백질 분해효소 억제제 칵테일 추가), 저온을 유지해야 합니다.

 

2. -80°C 보관 기간

• 글리세롤(일반적으로 10-50%)이나 소량의 완충 염을 함유한 상태에서 단백질은 -80°C에서 몇 달에서 1년 동안 안정적으로 보관될 수 있으며, 이는 단백질 자체의 안정성(구조 복잡성, 이황화 결합, 막 단백질 여부 등)에 따라 달라집니다.

• 보호제가 없고, PBS나 수용액만으로 보관할 경우, 냉동 및 해동 사이클이 구조에 심각한 영향을 미쳐 보통 몇 주에서 1-2개월 후에는 활성이 현저히 감소합니다.

• 빈번한 냉동 및 해동 방지를 위해 소량으로 나누어 한 번씩 사용하는 것을 권장합니다.

 

권장 사항

단백질 종류와 후속 용도(활성 검토, 구조 연구 또는 질량 분석)를 명확히 하여 적합한 완충 체계와 보호제를 선택하고, 준비 시 광범위 단백질 분해효소 억제제를 추가하여 보관 기간을 현저히 연장할 수 있습니다.

 

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