단백질 재가열 온도 시간은 얼마나 되나요? 희석한 후에도 끓일 수 있나요?

단백질 샘플을 다시 끓이는 것(즉, 가열 변성)은 SDS-PAGE 로딩 전에 단백질의 고급 구조를 파괴하여 전기 영동 이동이 주로 분자량을 반영하도록 하는 것입니다. 구체적인 재가열 온도와 시간은 다음과 같습니다:

 

1. 일반적인 재가열 조건

• 온도: 95°C 또는 100°C(끓는 물)

• 시간: 5분

샘플이 점성이 있거나 고농도, 막 단백질 등 복잡한 성분을 포함하는 경우 10분까지 적절히 연장할 수 있지만, 과도한 끓임으로 인한 단백질 분해를 피해야 합니다.

 

2. 희석 후 다시 끓일 수 있는지 여부

가능하지만, 다음 사항에 유의해야 합니다:

1. 버퍼 시스템의 완전성을 보장

희석 후에도 샘플에 환원제(예: DTT 또는 β-머캅토에탄올)와 SDS가 포함되어야 완전 변성과 환원이 보장됩니다. 그렇지 않으면 끓이는 의미가 없습니다.

 

2. 희석 배율은 너무 크지 않아야 합니다

너무 많이 희석하면 단백질 농도가 너무 낮아져 밴드의 선명도에 영향을 줄 수 있습니다. 일반적으로 희석 후에도 >0.5 μg/μL를 유지하는 것이 좋습니다.

 

3. 끓인 후 장기 보관을 권장하지 않음

재가열이 완료된 샘플은 빨리 로딩하는 것이 좋습니다. 특히 SDS와 환원제를 포함하는 시스템은 분해되거나 침전물이 형성되기 쉽습니다.

 

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