글루타르알데히드를 사용한 교차 결합 프로토콜은 어떻게 되나요?
글루타르알데히드는 널리 사용되는 교차결합제로, 단백질, 효소, 세포 등의 생물 샘플 고정과 교차결합에 널리 사용됩니다. 글루타르알데히드 교차결합 실험에서는 주로 단백질 복합체나 세포 구조를 안정화하는 데 사용되며, 아래는 일반적인 글루타르알데히드 교차결합 기본 프로토콜입니다(세포나 단백질을 예로 듦). 실제 실험 요구에 따라 조정할 수 있습니다.
1. 재료 준비
1. 글루타르알데히드 용액: 일반적으로 2.5% 또는 4% 농도로 저장된 수용액(상업적으로 구매 가능).
2. 완충액: 일반적으로 0.1M 인산 완충액(PBS) 또는 HEPES 완충액을 사용하며, pH는 보통 7.2-7.4로 유지합니다.
2. 프로토콜
1. 샘플 전처리
(1) 세포나 조직 샘플의 경우, 완충액으로 샘플을 세척하여 배양액이나 기타 방해 물질을 제거합니다.
(2) 단백질 샘플의 경우, PBS 또는 다른 적절한 완충액으로 적절한 농도로 조정합니다.
2. 글루타르알데히드 교차결합 용액 준비
글루타르알데히드 용액은 즉시 사용하도록 준비하며, PBS나 HEPES 등의 완충액으로 필요한 작업 농도로 희석합니다. 일반적으로 최종 농도는 0.1%-1.0%입니다.
3. 교차결합 반응
(1) 샘플을 글루타르알데히드 작업 용액에 담그며, 반응은 일반적으로 실온에서 10분에서 1시간 동안 진행됩니다. 구체적인 시간은 샘플의 특성과 실험 요구에 따라 다릅니다.
(2) 단백질 교차결합의 경우, 반응 시간과 농도가 교차결합 효율에 큰 영향을 미칩니다. 따라서 예비 실험을 통해 조건을 최적화할 수 있습니다.
4. 교차결합 반응 종료
(1) 적절한 완충액(PBS 등)으로 샘플을 세척하여 과잉 글루타르알데히드를 제거합니다. 반응을 종료시키기 위해 0.1M 글리신이나 에탄올아민(pH 7.5-8.0)을 사용하여 남은 활성 교차결합제를 소멸시킬 수 있으며, 일반적으로 5-10분 동안 처리합니다.
(2) 다시 PBS 완충액으로 샘플을 세척하여 소멸제를 제거합니다.
5. 후속 처리
교차결합이 완료된 후, 샘플은 실험 요구에 따라 Western blot, 질량 분석, 면역 침강 등의 하류 분석을 진행할 수 있습니다.
3. 주의사항
1. 신선한 용액: 글루타르알데히드는 쉽게 분해되므로, 교차결합 용액은 신선하게 준비해야 합니다.
2. 환기 환경: 글루타르알데히드는 일정한 독성과 자극성이 있으므로, 환기 장치 내에서 작업하며 증기를 흡입하지 않도록 주의해야 합니다.
3. 교차결합 조건 최적화: 다양한 실험 체계에 따라 글루타르알데히드의 농도와 반응 시간을 조정해야 하며, 예비 실험을 통해 최적의 조건을 결정할 수 있습니다.
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